从提取纯化差异中找线索：四代层析静丙的不同

免疫球蛋白( IgG) 是血液中除白蛋白外最丰富的蛋白，占血液总免疫球蛋白的75% ，是与体液免疫应答相关的主要免疫球蛋白¹，作为参与机体对抗感染的主要分子，具有与病原体或毒素结合、激活补体、加强吞噬作用的杀伤作用，并具有启动过敏反应和减轻移植器官排斥的能力，是临床应用中使用最广泛的免疫球蛋白^2-3。

上世纪60年代，欧洲率先推出了浓度为3%的第一代静脉注射免疫球蛋白；上世纪90年代，成都蓉生在国内首家推出浓度为5%的第三代静脉注射免疫球蛋白；2023年9月21日，国内首个第四代层析“静注人免疫球蛋白（pH4）”（简称“蓉生静丙®10%”）成功获批，标志着我国注射用人免疫球蛋白的生产水平迈入了国际先进行列。

免疫球蛋白制剂不断迭代更新，其如何从血浆当中分离出来？有哪些工艺技术呢？本次小编为大家汇总了当前运用最广泛的几种免疫球蛋白分离提取方法4：

PART

01

免疫球蛋白的粗提

低温乙醇沉淀法

1、原理

利用有机溶剂改变溶液的介电常数，从而通过控制蛋白质之间静电相互作用的办法选择性地沉淀蛋白

2、优点

• 可同时分离多种血浆成分
• 具有良好的分辨率和纯化效果
• 对细菌和病毒有消除灭活的作用

3、缺点

• 40%～50%的IgG可能在非 IgG 上清液中丢失或与杂质共沉淀
• 沉淀阶段需要在低于0℃的温度下进行
• 高浓度的乙醇会影响 IgG 的稳定

盐

析

法

根据不同蛋白质在同一浓度的盐溶液中溶解度不同及同一蛋白质在不同浓度的盐溶液中溶解度也不同，从而通过改变盐溶液浓度达到目的蛋白( 如 IgG) 与其他杂质蛋白分离纯化的目的。

饱和硫酸铵分步沉淀法

1、优点

• 操作简单
• 产品含量和得率都较高
• 利于工业化大量生产

2、缺点

• 沉淀的抗体必须再溶解
• 存在蛋白质聚集体
• 盐析过程所花费的时间较长

正辛酸-硫酸铵法

1、优点

• 抗体回收率和产率均高
• 抗体活性损失小
• 简单易行，无需复杂的设备仪器

2、缺点

IgG需要溶解，在商业规模生产中，操作步骤增加会使分馏过程易受微生物污染。

PART

02

免疫球蛋白的进一步纯化

凝胶过滤层析

1、原理

基于样品中蛋白质分子的相对大小和立体结构差异，在通过多孔凝胶介质时达到分离纯化目的。

2、优点

• 可去除与目的抗体具有相同电荷性的杂质

• 是与其他类型纯化组合使用的有价值的方法

3、缺点

• 特异性相对较差
• 分辨率相对较低

离子交换层析

1、原理

离子交换层析是根据蛋白质分子所带电荷及电荷密度不同，通过不同蛋白质吸附到吸附剂上的能力差异来实现分离纯化免疫球蛋白。

2、优点

• 操作简单
• 分离效果好
• 适用范围广
  

3、缺点

• 用时长，装柱要求高
• 可能造成目标蛋白丢失

亲和层析

1、原理

以目标分子与亲和配体特异性、可逆性结合为基础，通过生物高分子所特有的生物活性而进行的蛋白质分离、提纯和浓缩。

2、优点

• 亲和层析具有高选择性、高分辨率、高结合载量的优点，是分别蛋白质的一种极为有效的方法，只需经过一步处理即可使某种待提纯的蛋白质从很简单的蛋白质混合物中分别出来，且纯度很高。

• 是最有效的生物活性物质纯化方法，它对生物分子选择性的吸附和分别，可以取得很高的纯化倍数。此外蛋白在纯化过程中得到浓缩，结合到亲和配基后，性质更加稳定，其结果提高了活性回收率。此外它可以削减纯化步骤，缩短纯化时间，对不稳定蛋白的纯化非常有利。
  

3、缺点

• 对偶联配体纯度、洗脱液理化性质要求高
• 成本高，费用大

第四代蓉生静丙® 10%采用升级后的多种分离纯化工艺（辛酸沉淀＋两步离子交换层析＋亲和层析工艺）和病毒灭活及去除工艺，有效获得具有高浓度、高纯度、强生物活性的IgG，所得产品还具有不添加糖类稳定剂、更接近人体生理渗透压等特点，满足临床缩短输注时间和进一步降低使用风险的需求，是临床更安全、更高效、更关爱的IVIG治疗新选择，为实践住院无忧、溶血无忧、心肾无忧、血栓无忧提供更优方案。